治疗性蛋白质的LC-MS表征

白皮书

引言

开发用于治疗或诊断测试的蛋白质是大型,复杂的分子,需要专门的数据分析技术。 这些分析可提供蛋白质的基本序列,并可用于指示翻译后修饰(PTM),内部二硫键,整体蛋白质构象以及与其他分子的结合活性。 本文介绍的信息将集中于通常用于分析单克隆抗体(mAb)的四种分析技术。

 1.完整分析,包括糖型分化
2.肽图分析
3.内部二硫键
4.糖肽分析

图1. mAb样品的完整MS1光谱

完整分析

大多数蛋白质样品并非完全同源,蛋白质本身可能由多种蛋白形式组成。 对多个种群进行约150kD蛋白质的完整分析,需要高分辨率MS检测器和能够区分蛋白形式而没有伪影的软件包。

抗体蛋白通常具有多种糖基化形式,具有不同的种群。 Eurofins EAG Materials Science分析了具有多种糖型的单克隆抗体(mAb)样品的变性(非天然)确认,这些糖型是随连接聚糖的数量或类型而异的蛋白质变体。 使用高分辨率LC / MS系统Thermo Q-Exactive分析完整样品。 使用Protein Metrics的软件处理数据。 如图1所示,数据显示为复杂频谱。 这是由于大蛋白的多种电荷状态和多种糖型所致。 即使具有这种复杂性,高分辨率检测器也能够解析多种同位素,从而可以进行解卷积和鉴定糖型种群。 由于存在大尺寸,多种电荷状态和多种糖型,因此光谱数据非常复杂。 高分辨率质谱仪和先进的软件对于执行此类复杂分子样品的分析至关重要。

图2. mAb样品的高分辨率数据的放大视图

在图2中可以看到光谱的放大图。甚至在m / z 3000以上也显示了单个电荷状态的同位素分辨率,几乎具有基线分辨率。 这允许对存在的糖型进行阳性鉴定。

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