治療用タンパク質のLC-MS特性評価

白書

はじめに

治療や診断テストのために開発されたタンパク質は、特殊なデータ分析技術を必要とする大きくて複雑な分子です。 これらの分析は、タンパク質の基本配列を提供し、翻訳後修飾(PTM)、内部ジスルフィド結合、全体的なタンパク質コンフォメーション、および他の分子への結合活性を示すために使用できます。 このホワイトペーパーで紹介する情報は、モノクローナル抗体(mAb)の分析に通常使用されるXNUMXつの分析手法に焦点を当てています。

 1.グリコフォーム分化を含むインタクト分析
2.ペプチドマッピング
3.内部ジスルフィド結合
4.糖ペプチド分析

図1.mAbサンプルの完全なMS1スペクトル

完全な分析

ほとんどのタンパク質サンプルは完全に相同ではなく、タンパク質自体が複数のプロテオフォームで構成されている場合があります。 複数の集団で約150kDのタンパク質のインタクトな分析を実行するには、高解像度のMS検出器と、アーティファクトなしでプロテオフォームを区別できるソフトウェアパッケージが必要です。

抗体タンパク質は通常、さまざまな集団の複数のグリコシル化形態を持っています。 Eurofins EAG Materials Scienceは、複数の糖鎖を持つモノクローナル抗体(mAb)サンプルの変性(非ネイティブ)確認を分析しました。これらは、結合したグリカンの数や種類が異なるタンパク質変異体です。 無傷のサンプルは、高分解能LC / MSシステムであるThermoQ-Exactiveを使用して分析しました。 データは、ProteinMetricsのByos®ソフトウェアを使用して処理されました。 図1に示すデータは、複雑なスペクトルとして表示されます。 これは、大きなタンパク質と複数のグリコフォームの複数の電荷状態によるものです。 この複雑さがあっても、高分解能検出器は複数の同位体を分解することができ、グリコフォーム集団のデコンボリューションと識別を可能にします。 サイズが大きく、複数の電荷状態と複数のグリコフォームが存在するため、スペクトルデータは非常に複雑です。 このような複雑な分子サンプルの分析を実行するには、高分解能MSと高度なソフトウェアが不可欠です。

図2.mAbサンプルの高解像度データの拡大図

スペクトルの拡大図を図2に示します。個々の電荷状態の同位体分解能は、m / z 3000を超えても、ほぼベースライン分解能で示されています。 これにより、存在するグリコフォームの確実な識別が可能になります。

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